1冷凍管應如何解凍？
　　
　　取出冷凍管後，須立即放入37C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鍾內全部融化，並注意水麵不可超過冷凍管蓋沿，否則易發生汙染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預防冷凍管之爆裂。
　　
　　2細胞冷凍管解凍培養時，是否應馬上去除DMSO？
　　
　　除少數特別注明對DMSO敏感之細胞外，絕大部分茄子视频在线看（包括懸浮性細胞），在解凍之後，應直接放入含有10-15ml新鮮培養基之培養角瓶中，待隔天再置換新鮮培養基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解凍後細胞無法生長或貼附之問題。
　　
　　3可否使用與原先培養條件不同之培養基？
　　
　　不能。每一茄子视频在线看均有其特定使用且已適應之細胞培養基，若驟然使用和原先提供之培養條件不同之培養基，細胞大都無法立即適應，造成細胞無法存活。
　　
　　4可否使用與原先培養條件不同之血清種類？
　　
　　不能。血清是細胞培養上一個極為重要的營養來源，所以血清的種類和品質對於細胞的生長會產生極大的影響。來自不同物種的血清，在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。
　　
　　5何謂FBS,FCS,CS,HS?
　　
　　FBS(fetalbovineserum)和FCS(fetalcalfserum)是相同的意思，兩者都是指胎牛血清，FCS乃錯誤的使用字眼，請不要再使用。CS(calfserum)則是指小牛血清。HS(horseserum)則是指馬血清。
　　
　　6培養細胞時應使用5%或10%CO2？或根本沒有影響？
　　
　　一般培養基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩衝係統，而培養基中NaHCO3的含量將決定細胞培養時應使用的CO2濃度。當培養基中NaHCO3含量為每公升3.7g時，細胞培養時應使用10%CO2；當培養基中NaHCO3為每公升1.5g時，則應使用5%CO2培養細胞。
　　
　　7何時須更換培養基？
　　
　　視細胞生長密度而定，或遵照茄子视频在线看基本數據上之更換時間，按時更換培養基即可。
　　
　　8培養基中是否須添加抗生素？
　　
　　除於特殊篩選係統中外，一般正常培養狀態下，培養基中不應添加任何抗生素。
　　
　　9附著性細胞繼代時所使用之trypsin-EDTA濃度？應如何處理？
　　
　　一般使用之trypsin-EDTA濃度為0.05%trypsin-0.53mMEDTA.4Na。*次開瓶後應立即少量分裝於無菌試管中，保存於–20C，避免反複冷凍解凍造成trypsin之活性降低，並可減少汙染之機會。
　　
　　10懸浮性細胞應如何繼代處理？
　　
　　一般僅需持續加入新鮮培養基於原培養角瓶中，稀釋細胞濃度即可，若培養液太多時，可將培養角瓶口端稍微抬高，直到無法容納為止。分瓶時取出一部份含細胞之培養液至另一新的培養角瓶，加入新鮮培養基稀釋至適當濃度，重複前述步驟即可。
　　
　　11欲將一般動物細胞離心下來，其離心速率應為多少轉速？
　　
　　欲回收動物細胞，其離心速率一般為300xg(約1,000rpm)，5-10分鍾，過高之轉速，將造成細胞死亡。
　　
　　12細胞之接種密度為何？
　　
　　依照茄子视频在线看基本數據上之接種密度或稀釋分盤之比例接種即可。細胞數太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長之一重要原因。
　　
　　13細胞冷凍培養基之成份為何？
　　
　　動物細胞冷凍保存時zui常使用的冷凍培養基是含5-10%DMSO(dimethylsulfoxide)和90-95%原來細胞生長用之新鮮培養基均勻混合之。注意：由於DMSO稀釋時會放出大量熱能，故不可將DMSO直接加入細胞液中，必須使用前先行配製完成。
　　
　　14DMSO之等級和無菌過濾之方式為何？
　　
　　冷凍保存使用之DMSO等級，必須為Tissueculturegrade之DMSO(如SigmaD2650)，其本身即為無菌狀況，*次開瓶後應立即少量分裝於無菌試管中，保存於4C，避免反複冷凍解凍造成DMSO之裂解而釋出有害物質，並可減少汙染之機會。若要過濾DMSO，則須使用耐DMSO之Nylon材質濾膜。
　　
　　15冷凍保存細胞之方法？
　　
　　冷凍保存方法一：冷凍管置於4C30~60分鍾→(-20C30分鍾)→-80C16~18小時(或隔夜)→液氮槽vaporphase長期儲存。
　　
　　冷凍保存方法二:冷凍管置於已設定程序之可程序降溫機中每分鍾降1-3C至–80C以下，再放入液氮槽vaporphase長期儲存。*-20C不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80C冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
　　
　　16細胞欲冷凍保存時，細胞冷凍管內應有多少細胞濃度？
　　
　　冷凍管內細胞數目一般為1x106cells/mlvial，融合瘤細胞則以5x106cells/mlvial為宜。
　　
　　17應如何避免細胞汙染？
　　
　　細胞汙染的種類可分成細菌、酵母菌、黴菌、病毒和黴漿菌。主要的汙染原因為無菌操作技術不當、操作室環境不佳、汙染之血清和汙染之細胞等。嚴格無菌操作技術、清潔的環境、與品質良好之細胞來源和培養基配製是減低汙染之方法。
　　
　　18如果細胞發生微生物汙染時，應如何處理？
　　
　　加入相應抗生素，直接滅菌後丟棄之。
　　
　　19支原體(mycoplasma)汙染的細胞，是否能以肉眼觀察出異狀？
　　
　　不能。除極有經驗之專家外，大多數遭受支原體汙染的茄子视频在线看，無法以其外觀分辨之。
　　
　　20支原體汙染會對細胞培養有何影響？
　　
　　支原體汙染幾乎可影響所有細胞之生長參數，代謝及研究任一數據。故進行實驗前，必須確認細胞為mycoplasma-free，實驗結果之數據方有意義。
　　
　　21偵測出茄子视频在线看有支原體汙染時，該如何處理？
　　
　　直接滅菌後丟棄，以避免汙染其它茄子视频在线看。
　　
　　22CO2培養箱之水盤如何保持清潔？
　　
　　定期(至少每兩周一次)以無菌蒸餾水或無菌去離子水更換之。
　　
　　23為何培養基保存於4C冰箱中，顏色會偏暗紅色，且pH值會越來越偏堿性？
　　
　　培養基保存於4C冰箱中，培養基內之CO2會逐漸溢出，造成培養基越來越偏堿性，而培養基中之酸堿指示劑(通常為phenolred)的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養基偏堿之結果，將造成細胞生長停滯或死亡。若培養基偏堿時，可以通入無菌過濾之CO2，以調整pH值。
　　
　　24各種細胞培養用的dish，flask是否均相同？
　　
　　不同廠牌的dish或flask，其所coating的polymer不同，製造程序亦不同，雖對大部分細胞沒有太大之影響，惟少數細胞則可能因使用廠牌不同之dish或flask而有顯著之生長差異。
　　
　　25購買之細胞冷凍管經解凍後，為何會發生細胞數目太少之情形？
　　
　　研究人員在冷凍細胞之培養時出現細胞數目太少，大都是因為離心過程操作上的失誤，造成細胞的物理性損傷，以及細胞流失。建議細胞解凍後不要立刻離心，應待細胞生長隔夜後再更換培養基即可。
　　
　　26購買之細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因？
　　
　　研究人員在細胞培養時出現存活率不佳，常見原因可歸納為：培養基使用錯誤或培養基品質不佳。血清使用錯誤或血清的品質不佳。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍後，加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養溫度使用錯誤。細胞置於–80C太久。
　　
　　27收到之冷凍管瓶身破裂，瓶蓋有裂紋，或瓶蓋脫落之原因？
　　
　　冷凍管瓶蓋裂紋，或瓶身破裂，可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當，造成冷凍管裂損，建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋鬆動或鬆脫，乃因熱脹冷縮之物理現象，冷凍管有可能因此而造成細胞汙染，故冷凍管於放入和取出液氮桶時，均應立刻將冷凍管再一次扭緊。
　　
　　28如何選用特殊細胞係培養基？
　　
　　培養某一類型細胞沒有固定的培養條件。在MEM中培養的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長。總之，MEM做粘附細胞培養、RPMI-1640做懸浮細胞培養是一個好的開始，各種目的無血清培養AIMV（12005）培養基（SFM）。
　　
　　29L-穀氨酰胺在細胞培養中重要嗎？它在溶液中不穩定嗎？
　　
　　L-穀氨酰胺在細胞培養時是重要的。脫掉氨基後，L-穀氨酰胺可作為培養細胞的能量來源、參與蛋白質的合成和核酸代謝。L-穀氨酰胺在溶液中經過一段時間後會降解，但是確切的降解率一直沒有zui終定論。L-穀氨酰胺的降解導致氨的形成，而氨對於一些細胞具有毒性。
　　
　　30GlutaMAX-I是什麽？培養細胞如何利用GlutaMAX-I？這個二肽有多穩定？
　　
　　GlutaMAX-I二肽是一個L-穀氨酰胺的衍生物，其不穩定的alpha-氨基用L-丙氨酸來保護。一種肽酶逐漸裂解二肽，釋放L-穀氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常穩定，即使在121磅滅菌20分鍾，GlutaMAX-I二肽溶液有zui小的降解，如果在相同條件下，L-穀氨酰胺幾乎*降解。
　　
　　31什麽培養基中可以省去加酚紅？
　　
　　酚紅在培養基中被用來作為PH值的指示劑：中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。研究表明，酚紅可以模擬固醇類激素的作用，（特別是雌激素）。為避免固醇類反應，培養細胞，尤其是哺乳類細胞時，用不加酚紅的培養基。由於酚紅幹擾檢測，一些研究人員在做流式細胞檢測時，不使用加有酚紅的培養基。
　　
　　32培養基中丙酮酸鈉的作用是什麽？
　　
　　丙酮酸鈉可以作為細胞培養中的替代碳源，盡管細胞更傾向於以葡萄糖作為碳源，但是，如果沒有葡萄糖的話，細胞也可以代謝丙酮酸鈉。
　　
　　33目錄上說，Hank’s平衡鹽溶液(HBS)要在空氣中使用，不需要CO2培養箱。原因是什麽？Hank’s平衡鹽溶液(HBS)和Earle’s平衡鹽溶液(EBS)有什麽本質的功能差別？
　　
　　HBS和EBS的主要差別在於碳酸氫鈉的水平，在Eagles(2.2g/L)中比在Hanks(0.35g/L)中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡，以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2中，溶液會變堿，Hanks液在CO2培養箱中會變酸。如果希望在CO2培養箱中保存組織，需要用Eagles液，。如果僅僅是清洗將要在細胞培養基中儲存的組織，用Hanks液就可以了。
　　
　　34二價離子抑製胰蛋白酶活性嗎？使用胰蛋白酶時加入EDTA的目的是什麽？
　　
　　二價離子的確抑製胰蛋白酶活性。EDTA用來螯合遊離的鎂離子和鈣離子，以便保持抑製胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細胞前，用EDTA清洗細胞，以消除來自培養基中所有的二價離子。
　　
　　35當在無血清培養基中添加抗生素時，降低至少在有血清培養基中所使用濃度的50%。血清蛋白會結合和滅活一些抗生素。在無血清培養條件下，抗生素不被滅活，可能對於細胞達到毒性水平。
　　
　　36一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時，您應該在兩到三周內使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍後就開始降解。
　　
　　37大部分添加物和試劑zui多可以凍融3次，如果次數更多都會在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉澱，將會影響它的性能。
　　
　　38在溶解的一周內使用貯存在4℃冰箱中的液體胰蛋白酶溶液。胰蛋白酶在4℃就可能開始降解，如果在室溫下放置超過30分鍾，就會變得不穩定。