免疫熒光是指隻標記一種蛋白質分子，方法比較簡單，隻要按照染色步驟去做，通常不存在太多的問題。但要注意固定液的選擇，固定液選擇的合適與否，可能會直接影響染色結果。
1、冰凍切片製備：建議用新鮮組織，否則組織細胞內部結構破壞，易使抗原彌散。選用幹淨鋒利的刀片、組織一定要冷凍適度等，防止裂片和脫片嚴重。
2、組織切片固定：切好片風幹後立即用冰丙酮等固定液進行固定5-10 min，尤其要較長時間保存的白片，一定要及時固定和適當保存。
3、血清封閉：為防止內源性非特異性蛋白抗原的結合，需要在一抗孵育前先用血清(與二抗來源一致)封閉，減弱背景著色。血清封閉的時間是可以調整的，一般10-30 min。
4、一抗孵育條件：在免疫組化反應中重要，包括孵育時間和抗體濃度。一抗孵育溫度有幾種：4℃、室溫、37℃，其中4℃效果較佳；孵育時間：這與溫度、抗體濃度有關，一般37℃1-2 h，而4℃過宿和從冰箱拿出後37℃複溫45 min。具體條件還要摸索。
5、二抗孵育條件：二抗一般室溫或37℃立即觀察，若將標本放在聚乙/烯塑料袋中4℃30 min-1h，具體時間需要摸索，而濃度一般有工作液，若是濃縮液還要摸索濃度，切記要避光反應。但在免疫熒光中茄子视频破解版一般先把二抗濃度和孵育時間先定下，然後去摸索一抗濃度和孵育時間。最後，熒光素標記的二抗隨著保存時間的延長，可能後有大量的遊離熒光素殘留，需要注意配製時小包裝和並進行適當的離心。
6、複染：目的是形成細胞輪廓，從而更好地對目標蛋白進行定位。一般常用DAPI複染。
7、封片：為了長期保存，茄子视频破解版一般用緩衝甘油等封片，此外還有專門的抗熒光萃滅封片液。避免產生氣泡，方法是直接在載玻片組織上滴一滴封片液，然後一手拿住蓋片某一拐角，而另一手拿對麵的那個拐角，接近封片液近端的拐角先降低，直至接觸到液體時為止；當發現液體接觸麵在不斷彌散時，則可以緩慢降低另一拐角，這樣一般不會產生氣泡。
