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免疫熒光的注意事項分為哪幾點呢-上海茄子视频破解版生物科技有限公司



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    免疫熒光的注意事項分為哪幾點呢
    更新時間:2021-01-21 點擊次數:1341次
       免疫熒光是根據抗原抗體反應的原理,先將已知的抗原或抗體標記上熒光素製成熒光標記物,再用這種熒光抗體)作為分子探針檢查細胞或組織內的相應抗原(或抗體)。
     
      在細胞或組織中形成的抗原抗體複合物上含有熒光素,利用熒光顯微鏡觀察標本,熒光素受激發光的照射而發出明亮的熒光,可以看見熒光所在的細胞或組織,從而確定抗原或抗體的性質、定位,以及利用定量技術測定含量。
     
      免疫熒光注意事項
     
      1.對熒光標記的抗體的稀釋,要保證抗體的蛋白有一定的濃度,一般稀釋度不應超過1:20,抗體濃度過低,會導致產生的熒光過弱,影響結果的觀察。
     
      2.染色的溫度和時間需要根據各種不同的標本及抗原而變化,染色時間可以從10 min到數小時,一般30 min已足夠。染色溫度多采用室溫(25℃左右),高於37℃可加強染色效果,但對不耐熱的抗原(如流行性乙型腦炎病毒)可采用0-2℃的低溫,延長染色時間。低溫染色過夜較37℃30 min效果好的多。
     
      3.為了保證熒光染色的正確性,*試驗時需設置下述對照,以排除某些非特異性熒光染色的幹擾。
     
      (1)標本自發熒光對照:標本加1-2滴0.01mol/L,pH7.4的PBS。
     
      (2)特異性對照(抑製試驗):標本加未標記的特異性抗體,再加熒光標記的特異性抗體。
     
      (3)陽性對照:已知的陽性標本加熒光標記的特異性抗體。
     
      如果標本自發熒光對照和特異性對照呈無熒光或弱熒光,陽性對照和待檢標本呈強熒光,則為特異性陽性染色。
     
      4.一般標本在高壓汞燈下照射超過3min,就有熒光減弱現象,經熒光染色的標本較好在當天觀察,隨著時間的延長,熒光強度會逐漸下降。
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